Rapp. Comm. int. Mer Médit., 37,2004

272

A SUMMARY DESCRIPTION OF THE MAIN BACTERIAL SPECIES PRESENT 

IN TUNISIAN COASTAL AREAS

EL Bour M.*, Attia El Hili H., Lakhal F., Ochi I., Mraouna R et El Abed A.

Lab. de Pathologie – INSTM – Salammbô, Tunisie - * monia.elbour@instm.rnrt.tn

Abstract

Monitoring different bacterial populations in coastal and lagoonal areas in Tunisia allowed us to distinguish more than 600 bacterial strains

from seawater, sediments, shellfish and moribund fishes. Thirty-six different aerobic and anaerobic bacterial species were isolated.

Aeromonas hydrophilawas the most dominant species isolated during the last decade (75%). Biotyping methods were used to characterize

52 different biotypes within this species. Antimicrobial typing showed that multi-resistant strains were common among A. hydrophila.

Experimental infection assays indicated negative effect of A. hydrophilaon the mussel (Mytilus galloprovencialis). Studies are currently

conducted to determine the effect of oligotrophic stress upon the biochemical, molecular and virulence characteristics of A. hydrophila.

Keywords : bacteria, aeromonads, biotyping, survival, pathogenesis.

Introduction 

By using a biomonitoring approach for several coastal regions in

Tunisia, we found that different bacterial populations were

widespread in these areas [1]. Aerobic and anaerobic bacterial

populations showed high levels of heterogeneity [2]. The present work

describes features of the main bacterial species (Aeromonas

hydrophila)present in Tunisian coastal areas.

Materials and Methods 

Sampling and isolation: different bacterial strains were isolated from

costal and lagoonal Tunisian ecosystems originating from the water

column, sediment, shellfish and moribund fishes during the period

1994-2001. All the bacterial strains (mesophilic and psychrophilic

aerobic and anaerobic populations) were isolated on basis of growth

on selective media [3s] and morphological features. 

Biotyping and antibacterial sensitiveness analysis: the characteriza-

tion tools included: production of catalase and oxydase enzymes and

biochemical Api system profiles (Api 20E, Api 20NE, Api 50CHE and

Api 32Ana) besides the Biolog test of Micromer. The antibacterial

sensitivity profiles for all the bacteria isolated were detected by the

standard antibiogram method.

Oligotrophic stress analysis: The ability of Aeromonas hydrophila

strains to survive in seawater was experimentally tested in micro-

cosms inoculated and incubated at ambient temperature (about 20°C)

in the dark without shaking. Growth and survival of bacteria were fol-

lowed periodically by viable counts and measurements of optical den-

sities at wavelength (at 620nm).

Experimental infection assays of M. galloprovencialis: These assays

were done to test effect of A.hydrophilaspecies on mussels maintai-

ned under farming conditions. Thus, we inoculated samples of mus-

sels with suspension of A. hydrophila(suspension title = 5.10

7

cells/ml). Biological modifications of M. galloprovincialiswere

detected using the index condition measured periodically.

Results and Discussion 

About 600 bacterial strains (87% aerobic species and 13%

anaerobic species) were isolated from diverse habitats including

water, sediments, shellfish and moribund fishes. The biochemical

characterization profiles indicated 11 anaerobic species and 25

aerobic species. 

A. hydrophilawas the most dominant species isolated (75%).

According to the enzymatic and metabolic tests, we distinguished 52

different biochemical profiles within the species A. hydrophila. The

main profiles (15 biotypes) are listed in Table 1.

The results of antibiotic sensitivity tests showed that, multi-

resistance patterns were common to more than one biochemical

profile of A. hydrophila (Fig.1). No specific correlation was found

between biotypes and antibiotic resistance profiles obtained.

Under oligotrophic conditions, A. hydrophilastrains grew slowly

during the initial 8 d of incubation. Subsequently, the viable counts

decreased and no growth was detected after 158 d (Fig.2).

Mussels infected by A. hydrophilashowed structural modifications

of gonads. The index condition measured was in?uenced by the A.

hydrophilastrains injected. 

Conclusion 

Aerobic mesophilic bacteria were abundant in coastal ecosystems.

Within these populations, A. hydrophilawas the dominant species. Its

growth seems to be in?uenced by the oligotrophic conditions of the

seawater. Bivalves harboured different kinds of aerobic mesophilic

bacteria. It seems that shellfish were affected by high concentration of

mesophilic aeromonads. 

Fig. 1: Antibacterial resistance profiles of Aeromonads (A.hydrophila)

Legend: PG

: penicillin 

G,

Amx : amoxicillin, 

Ox

: oxacillin, 

Fox

: cefoxitin,

Cro

: ceftriaxon, 

St

: Streptomycin, 

Ne

: neomycin, 

AR

: flumequin, 

NN

:

tobramycin, 

OL

: olendomycin, 

C

: Chloramphenicol, 

FM

: furans, 

SXT

:

Trimethoprim-sulfamids, 

Ra

: Rifamycin 

Table I : The main biotypes described within the species Aeromonas

hydrophila

Legend : 

(+) : positive reaction to the enzymatic or metabolic test, (-)

: negative reaction to the test. (No3): nitrate reduction, (TRP) :

Tryptophane, (ADH) : Arginine dihydrolase, (Ure) : Urease, (ESC) :

Esculine, (GEL) : Gelatinase, (PNG) : Beta galactosidase, (Ara) :

Arabinose, (Mne) : Mannose, (Man) : Mannitol, (Nag) : N-

acetylglucosamine, (Mal) : Maltose, (Gnt) : Gluconate, (Cap) : Caprate,

(Adi): Adipate, (Mlt) : Malate, (Cit) : Citrate, (Pac) : Phenyl acetate,

(Ox) : oxydase, (Cat) : Catalase.

References 

1-El Bour M., Attia El Hili H., Mraouna R. and Ayari W., 2001.

Bacteriological Study of Mesophyllic Aeromonads Distribution in

Shellfish. Proceedings of the fifth international Conference on the

Mediterranean coastal environment, vol.1, pp 556-565. 

Fig. 2 : Survival

curves of A.

hydrophilain

Trypcase Soja

Broth (TSB ) and

in sea water